Kubo M, et al. A nonsynonymous SNP in PRKCH (protein kinase C eta) increases the risk of cerebral infarction. Nat Genet. 2007; 39: 212-7.

目的

　脳梗塞発症に関与する遺伝的要因の検討。

研究デザイン

(1) 脳梗塞関連遺伝子の同定
　ゲノムワイド患者対照研究。タグSNP（一塩基多型）による脳梗塞関連遺伝子の同定，および同遺伝子上に存在する非同義（アミノ酸置換をともなう）SNPと脳梗塞発症との関連の検討を行った。
(2) 検証研究
　上の結果について，独立した別の集団で解析を行った。
(3) 前向きコホート研究
　久山町研究第3集団において，上で得られた候補SNPの遺伝子型決定および14年間の追跡を行い，脳梗塞発症との関連を前向きに検討した。

コホート

(1) 脳梗塞関連遺伝子の同定
　・症例群: 九州の7病院で2004年時点で脳梗塞と診断された1112例。内訳は，ラクナ梗塞491例，アテローム血栓性脳梗塞369例，心原性脳梗塞136例，病型不明116例。
　・対照群: 2002～2003年にかけて久山町研究に参加した3328例のうち，脳卒中または冠動脈疾患既往例を除いた上で，年齢・性別を調整し無作為に抽出した1112例。
　症例群では，対照群より高血圧および糖尿病の割合が有意に高かった（P＜0.0001）。
(2) 検証研究
　・症例群: バイオバンクジャパン（東京大学医科学研究所）に登録された脳梗塞例のうち，ラクナ梗塞の1137例。
　・対照群: バイオバンクジャパン登録例から無作為に抽出した1875例。
(3) 前向きコホート研究
　1988年に久山町研究に参加した2742例から追跡開始時の脳卒中または冠動脈疾患既往例を除いた2637例のうち，ゲノムDNAが採取された1642例（14年間追跡）。

結　果

(1) 脳梗塞関連遺伝子の同定
　脳梗塞症例群1112例および対照群1112例を対象に，JSNP（Japanese Single Nucleotide Polymorphisms）データベース収載の52608のタグSNPを用い，脳梗塞関連遺伝子の同定を試みた。その結果，プロテインキナーゼCη（PKCη）をコードするPRKCH遺伝子上のタグSNPがラクナ梗塞との有意な相関を示し（P＝4.73×10^-6，多重比較調整後P＝0.0036），PRKCHが脳梗塞関連遺伝子と同定された。アテローム血栓性脳梗塞との相関はなかった。
　次に，PRKCH遺伝子の中でラクナ梗塞と強く関連するブロックにある候補SNP「1425G/A」について解析を行った結果，Aアレルでラクナ梗塞との有意な関連が見られた（vs. Gアレル，P＝9.84×10^-6，オッズ比1.66，95％信頼区間1.33-2.09）。

(2) 検証研究
　上記の結果は，バイオバンクジャパンから選んだラクナ梗塞1137例および対照1875例についての検証研究からも確認された。

(3) 前向きコホート研究
　1988年より久山町研究に参加した1642例について遺伝子型決定および14年間の追跡を行い，上で得られた候補SNPと脳梗塞発症の関連を前向きに検討した。
　67例が脳卒中を初発（ラクナ梗塞42例，アテローム血栓性脳梗塞18例，心原性脳梗塞7例）。遺伝子型ごとの脳梗塞の累積発症率は以下のようになった。
　　　・GG型　2.96％　（n＝1063）
　　　・GA型　3.86％　（n＝518）
　　　・AA型　8.18％　（n＝61）
AA型の発症率はGG型より有意に高く（P＝0.030），ハザード比は2.83（vs. GG型，95％信頼区間1.11-7.22）となった。

　1425G/Aの変異によって，PKCηの374番目のアミノ酸はバリンまたはイソロイシンのいずれかになる（V374I）。V374IはPKCηのATP結合部位に位置することから，374Vおよび374Iのキナーゼ活性を比較した結果，374Iは374Vの1.6倍高い活性を示した（P＝0.009）。

　また，ヒトにおけるPKCηの発現を調べた結果，特に胸腺および脾臓で高い発現レベルを示した。冠動脈組織で見ると，血管内皮細胞および一部の泡沫状マクロファージにおける発現が観察された。
　また，アテローム性動脈硬化の進行度とPKCηの発現レベルは有意な正の相関を示した（P＜0.0001）。